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Eliminación de cancro en cítricos

La irradiación es uno de los procesos de conservación de alimentos que puede colaborar en la apertura de mercados para los alimentos uruguayos. En el caso de los cítricos, su ingreso a algunos países, por ejemplo Estados Unidos, está impedido por restricciones fitosanitarias.

Ing. Quim. Antonio Montalbán Artecona
Director de Natudor S. A. (Tecnología de Irradiación)

Daniel Perticaro, Presidente de ALATI

La cancrosis es una enfermedad de las plantas cítricas causada por la bacteria ya mencionada, la Xantomonas axonopodis pv.citri .

La OIEA y CNEA organizaron el Workshop “Estableciendo pautas para los sistemas de gestión integrada”

Levantar una barrera fitosanitaria es muy difícil. Aunque a menudo se constituyen en barreras no arancelarias que disimulan protecciones comerciales, el primer paso para intentar levantarlas es demostrar la eficiencia de un tratamiento. 
Una década de estudios de irradiación de citrus llevados a cabo a lo largo de varios años por investigadores trabajando en diferentes instituciones uruguayas (1) contribuyeron, como uno de los principales productos, entre otros argumentos, a la instalación de la planta de irradiación modular. 
Esto es muy importante para la citricultura uruguaya que es netamente exportadora. Actualmente se producen 200.000 toneladas de fruta cítrica por año, el 50 % de esa cantidad se exporta, siendo Europa el destino principal. Una de las restricciones fitosanitarias que impiden la entrada a otros mercados es la referida al cancro cítrico, una enfermedad de las plantas cítricas producida por una bacteria gram negativa, la Xantomonas axonopodis pv.citri, que puede eliminarse por irradiación. 
Los estudios realizados ofrecen argumentos técnicos para presentar a las autoridades competentes de los países importadores de la fruta uruguaya a los efectos de que levanten las restricciones. 

EFECTOS DE LA IRRADIACION 
Desde el punto de vista microbiológico, los efectos provocados por la irradiación en los alimentos, se basan en la eliminación parcial o total de los microorganismos presentes. 
La muerte de los microorganismos se debe a la acción de la radiación sobre moléculas vitales para ellos. La sensibilidad a la radiación del microorganismo depende fundamentalmente del tipo de que se trate. En orden creciente de resistencia a la radiación se tiene: insectos, bacterias gram negativo, gram positivo, hongos, esporas de hongos, esporas de bacterias y virus. 
La sensibilidad también depende del medio en que se encuentren, son más sensibles en medios acuosos y en presencia de oxígeno. 
Otros efectos de la radiación sobre los alimentos son del tipo fisiológico, como la inhibición de brotación, por ejemplo en papas, cebollas, ajos; el retardo de maduración, por ejemplo en tomates; y los cambios en permeabilidad de paredes celulares, los que disminuyen el tiempo de secado o de cocción de vegetales deshidratados. 
Del punto de vista del alimento se puede decir que los cambios microbiológicos resultantes, al igual que en otros procesos de conservación, dependen del producto, su microflora, la dosis de irradiación y las condiciones de almacenamiento posteriores. 
Toxicológicamente no existen problemas con dosis del orden de 10 KGy (2), ni hay efectos por disminución del contenido de productos nutritivos en alimentos irradiados hasta 10 KGy. 

CANCRO Y OTRAS PLAGAS 
La cancrosis es una enfermedad de las plantas cítricas causada por la bacteria ya mencionada, la Xantomonas axonopodis pv.citri . Tiene dos formas de contagio, por la actividad del hombre que lleva material contaminado de un lugar a otro y por el contagio de una hoja a otra por las acciones del viento y la lluvia. El cancro existe en Argentina, Brasil y Uruguay, siendo una enfermedad cuya consecuencia principal es la presencia de pintitas, manchas externas sobre la cáscara de la fruta, que limita su uso para mercado fresco. También puede causar la caída de las frutas y disminuir la producción, pero principalmente la restricción fitosanitaria a la entrada de cítricos a países sin cancro se debe a la posibilidad de introducir la bacteria al país. Por esto, para algunos mercados, no alcanza con elegir los frutos de zonas sin cancro, sin pintitas, ni pústulas, sino que hay que mostrar que no hay bacterias que viajen con la fruta. 
Los cítricos también son atacados por hongos, estimándose las pérdidas por estos en 25 - 30 % a un mes de la cosecha, y la molesta mosca de la fruta. Estas constituyen una de las plagas más importantes del mundo. Su existencia obliga al empleo de insecticidas y de tratamientos cuarentenarios para su ingreso en áreas no infectadas. Las principales especies de estas últimas incluyen a la mosca Ceratitis capitata y Anastrepha ludens.
Hay diferentes técnicas (y protocolos de aplicación de las mismas) para eliminar estas plagas de forma que la fruta cumpla con los requisitos para el ingreso al país importador. Entre dichas técnicas se encuentra la irradiación, excepto para el cancro. No hay en la bibliografía (no se han encontrado) estudios de irradiación de la Xanthomona que produce la cancrosis. 
Por esto los investigadores uruguayos, consideramos importante estudiarlo. 

RESISTENCIA A LA RADIACION 
A la dosis necesaria para matar el 90% de los microorganismos presentes se le llama D10 (Dosis necesaria para disminuir la concentración en una potencia de 10) y es una medida de la resistencia de los microorganismos a las radiaciones. 
Los hongos que atacan a la fruta son los más resistentes a las radiaciones, la Alternaria citri es el más radioresistente, luego Penicillum digitatum, Penicillum italicum, Phomosis citri, son más sensibles. Las esporas de Penicillum tienen un D10 de 0,5 KGy. (4) y (5).
Sobre la posibilidad de eliminar Sarna de los citrus, producida por Elsinoe fawcetti, Sphaceloma fawcetti . Si la sarna se encuentra en el orden de resistencia del hongo Penicillum , dato que no existe en la bibliografía, se estaría eliminando el 90 % con dosis de 0,5 KGy. 
La mosca de la fruta es lo más sensible a las radiaciones. Dosis bajas de irradiación de 0,25 Kgy son aceptadas internacionalmente (3).  
No había datos de D10 de las Xanthomonas, pero sí de bacterias similares, como las Pseudomonas (11) que tienen D10 de 0,05 KGy en caldo nutriente y de 1,2 a 2,3 KGy, según el medio de irradiación, de dosis letal (7). 
Por lo tanto dosis de irradiación para eliminar hongos, eliminan al cancro que es más sensible y elimina la mosca que es aún más sensible. 

INVESTIGACION 
Para determinar la radio-sensibilidad de la bacteria y así establecer la eficacia de dosis, se realizaron diferentes investigaciones. Uno de los objetivos era determinar el D10 de las Xanthomonas , ya que con ese dato puede expresarse el porcentaje de bacterias que pueden eliminarse con una dosis determinada. 
Otras buscaban determinar si las condiciones externas de la fruta como la cáscara, o el sabor se modificaban al ser irradiadas (9). 
Las investigaciones se llevaron a cabo en Xanthomonas en suspensión (en solución de cloruro de sodio) y Xanthomonas en pústulas sobre el propio fruto. 
La concentración inicial en estas últimas se estimó en función del tamaño de las pústulas. Se irradiaron naranjas con cuatro niveles de desarrollo de pústulas: (se considera que los tamaños hasta 3 mm son los de mayor porcentaje de bacterias vivas). Los tamaños de pústulas analizados fueron: Cabeza de alfiler, 1mm, 2mm y 3 mm. (8). 
Se irradiaron muestras a diferentes dosis, lo que equivale a diferentes tiempos de exposición, y se determinó la concentración de bacterias que sobrevivieron en cada tratamiento. 
En base a los resultados obtenidos se elaboraron las curvas de dosis/respuesta y se determinaron las dosis adecuadas que interrumpían el desarrollo del estadío más resistente. 
Para el diseño del experimento se tuvo en cuenta que las frutas fueran todas irradiadas con las mismas dosis, utilizando para ello el producto infestado en forma natural, dejando una muestra control. Durante el período de observación post-tratamiento se mantuvieron las condiciones más favorables para la supervivencia de las plagas tratadas. 
Las irradiaciones se hicieron en un proyecto conjunto y de varios años de duración, entre Facultad de Ciencias (Centro de Investigaciones Nucleares, A. Montalbán) y MGAP-DGSA (Dpto. Laboratorios Biológicos) y LATU (Proyecto Irradiador), en un Gammacell 4000 A de origen India, de 4 litros de capacidad y con 300 Curies de actividad en el momento de las irradiaciones. 
La dosis en el comienzo de los experimentos fue de 0,51 KGy por hora,(Julio 2000). 
Los resultados obtenidos fueron para la irradiación de Xanthomonas en suspensión: D10 = 0,05 KGy (8) y para la irradiación de Xanthomonas en pústulas de la propia fruta D10 = 0,19 KGy (8). 
Las diferencias en los resultados son razonables ya que en medio líquido la bacteria es muy sensible a la irradiación. En la pústula sobre la fruta misma, se trata de un medio “seco” donde aumenta en más de tres veces la radioresistencia. 
Al haber determinado D10 en la propia fruta, se puede decir que, con una dosis de 0,6 KGy, necesaria para eliminar más del 90 % de hongos, se eliminaría más del 99,9 % de las Xanthomonas. 
En otros estudios (6) y (9) realizados se demostró que dosis de 0,8 KGy para naranjas Navel y Valencia, mandarina y limón, no alteran las condiciones externas de la fruta, cáscara, ni el sabor. 
En una irradiación comercial todo el volumen tratado deberá recibir la dosis establecida como mínima. No obstante, de acuerdo al diseño de la instalación, algunos sectores de los bultos podrán recibir dosis mayores, por tanto se recomienda que el producto tolere dosis superiores a la establecida como mínima. Por ejemplo una dosis máxima de irradiación de 0,8 KGy, por los motivos de la uniformidad de dosis de las plantas industriales, estará entregando una dosis mínima del orden de 0,5- 0,6 KGy. 

ENSAYOS EN PACKING DE EXPORTACION 
Se realizó también un ensayo simulando las condiciones comerciales, en la planta semiindustrial de irradiación del Centro Atómico de Ezeiza, Argentina. Se irradiaron limones, naranjas Valencia, y dos tipos de mandarinas, Murcott y Salteña con una dosis de 0,60 KGy. 
Este ensayo era importante por representar la realidad en una planta industrial. 
Es necesario tener en cuenta que la determinación de la dosis no tiene la precisión de los ensayos previos realizados en equipo de laboratorio. Este ensayo fue llevado a cabo por el Grupo de Trabajo de Irradiación del LATU (A. Abreu). 
Los resultados de este ensayo determinaron una reducción superior a 1000 veces lo que confirma la determinación del D10. 

CONCLUSIONES 
A partir de las investigaciones realizadas se propone en el fruto pronto para la exportación (encerado y empacado) un tratamiento por irradiación con 0,8 KGy máximo - 0,5 KGy mínimo, que elimina la presencia de los hongos señalados en un 90% y es superior a la necesaria para eliminar bacterias 99,9 % así como también evita el tratamiento cuarentenario por mosca. 
Al no procesarse para exportación fruta proveniente de zonas infectadas, y además al revisarse la fruta en línea de packing y eliminarse piezas sintomática, se adiciona un factor de seguridad que disminuye el índice de riesgo en más de 1.000 veces. Esta es una condición muy importante para hacer valer a la hora de levantar las barreras comerciales.


Mobirise

Ing. Químico Antonio Montalban Artecona
• Egresado Facultad de Ingeniería de la Universidad de la República Oriental del Uruguay
• Director de Natudor S. A. (Tecnología de Irradiación) de 2012 a 2018.
• Jefe de Dpto. de Asuntos Técnicos en la Gerencia de Comercio Exterior del Laboratorio Tecnológico del Uruguay (1993–2010).
• Centro de Investigaciones Nucleares de la Facultad de Ciencias, de la Universidad de la República. Responsable del área de Aplicaciones Industriales de las Radiaciones
(1976– 2003). 

Más información:
nino.montalban@hotmail.com

1. María Inés Ares de la Dirección General de Servicios Agrícolas y Enrique Verdier y Silvia Méndez de Laboratorios Biológicos , ambos del Ministerio de Ganadería y Agricultura y Pesca; Aníbal Abreu, Antonio Montalbán y Pablo Betancourt integrantes del Proyecto Irradiador del LATU y Antonio Montalbán Centro de Investigaciones Nucleares de la Facultad de Ciencias
 2. La energía recibida por el material se mide por la "Dosis" que es energía absorbida por unidad de masa, su unidad es el Gray (Gy) que corresponde a 1 Joule por kilogramo. 
3. APHIS U.S. Department of Agriculture, Animal and Plant Health InspectionService. 2002. Irradiation Phytosantary Treatment of Imported Fruits and Vegetables, APHIS, USDA, Proposed Rule. 
4. International Atomic Energy Agency. 1982. D10 Values of selected bacteria, Training manual on Food Irradiation. IAEA 
5. Ahmed, E.R.y Dennison, R.A. s/f Summary of the common citrus fruits diseases causing storage losses . 
6. Hana, Y, Demicheri, F. Alfaro, I. Lombardi, P.. 2001. Diseño e implementación de una planta de irradiación de alimentos. Estudio experimental, Facultad de Ingeniería, Facultad de Ciencias, Proyecto fin de carrera de Ingeniería Química. 
7. Frazier, W.C. y Westhoff, D. 2008. Preservation by Radiation. En: Food Microbiology Tata-McGraw Hill, chapter 10. 
8. Montalbán, A, Verdier, E. y Méndez, S., 2008. Viabilidad de Xanthomonas citri subsp.citri en fruta cítrica sintomática sometida a irradiación (rayos gamma). Fitopatología Vol 43 No. 3, Diciembre 2008. 
9. Betancurt, P.,Ares, M.I., Montalbán, A.,Arcia, P.,Borthagaray, M.D.,Curutchet, A.;Pica, L., Soria, A. y Abreu, A.V., 2007. Effect of Irradiation as Quarantine Treatment on Citrus Fruit Quality , LATU, MGAP, 2007

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